स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस एक ग्राम-पॉजिटिव कोगुलेज़-नेगेटिव जीवाणु है जो अस्पतालों में बहुत आम है। हाल के वर्षों में, अस्पताल-अधिग्रहित संक्रमणों के उच्च जोखिम के कारण चिंता बढ़ रही है। स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस आगे त्वचा के संक्रमण, मेनिन्जाइटिस, पेरिटोनिटिस और यहां तक कि सेप्सिस का कारण बन सकता है। नैदानिक निदान में देरी से स्वास्थ्य की स्थिति में गिरावट हो सकती है, इसलिए स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का तेजी से निदान सटीक उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।
लिआनुंगंग सेकंड पीपुल्स हॉस्पिटल के केंद्रीय प्रयोगशाला विभाग के प्रोफेसर जी टूओ के अनुसंधान समूह ने "एनालिटिका चिमिका एक्टा" जर्नल में मीर-एलएफएस के साथ नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का एक रैपिड एंड विजुअल डिटेक्शन प्रकाशित किया, 6.2 के एक प्रभाव कारक के साथ।
अध्ययन का अवलोकन
इस अध्ययन में, प्रो। जी टूओ के समूह ने एमवीएए जीन पर आधारित miRA-LFS द्वारा स्टैफिलोलाइटिकस हेमोलिटिकस का पता लगाने के लिए एक विधि की स्थापना की, और तेजी से पैथोजेन का पता लगाने के लिए पार्श्व प्रवाह परीक्षण स्ट्रिप एलएफ के साथ संयुक्त रूप से निरंतर तापमान तेजी से न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकी miRA का उपयोग किया। प्रयोग 37 डिग्री पर किया गया था और परिणाम 9 मिनट के भीतर 0 का पता लगाने की संवेदनशीलता के साथ पाए गए थे। 147 cfu/प्रतिक्रिया। MIRA-LFS का पता लगाने की विधि नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के निश्चित-बिंदु पहचान के लिए उपयुक्त है, और POCT द्वारा स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस की पहचान की विधि का एहसास करती है, जो कि बिना क्षेत्रों में रोगों के तेजी से निदान और उपचार के लिए महान मूल्य है। अनुसंधान समूह ने 95 यादृच्छिक नैदानिक नमूनों का विश्लेषण करने के लिए miRA-LFS, QPCR और पारंपरिक बैक्टीरियल संस्कृति विधियों का उपयोग किया, और नैदानिक प्रयोज्यता की पुष्टि की।
तलाश पद्दतियाँ
MIRA-LFS परीक्षण का एक योजनाबद्ध आरेख ऊपर दिखाया गया है। इस अध्ययन में, AMPFUTURE BIOTECH का डीएनए निरंतर तापमान रैपिड प्रवर्धन किट (कोलाइडल गोल्ड टेस्ट स्ट्रिप टाइप) और न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन टेस्ट स्ट्रिप का उपयोग किया गया था।
MVAA जीन की प्राइमर लंबाई 30-35 न्यूक्लियोटाइड्स थी, और प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई 100-350 bp थी, और कुल 6 जोड़े उम्मीदवार प्राइमरों को डिज़ाइन किया गया था। मानक स्टैफिलोलिटिक स्टैफिलोकोकस उपभेदों के GDNA का उपयोग miRA विश्लेषण के लिए किया गया था, उम्मीदवार प्राइमरों की जांच की गई थी, और प्रवर्धित उत्पादों को 2% agarose gel वैद्युतकणसंचलन द्वारा कल्पना की गई थी।
(प्रवर्धन उत्पादों को agarose जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रदर्शित किया जाता है)
जांच को तब आगे प्राइमर अनुक्रम (16 बीपी पिछड़े) के अनुसार डिज़ाइन किया गया है। जांच के 5 'छोर को FITC के साथ लेबल किया गया है और 3' छोर को C3 लेबल किया गया है। जांच में 31- स्थिति न्यूक्लियोटाइड को 5 'छोर से 30 बीपी की दूरी पर THF के साथ बदल दिया जाता है और 3' छोर से 15 बीपी। चयनित रिवर्स प्राइमर के 5 'छोर को बायोटिन के साथ लेबल किया गया है।
(क्रॉस-डिमर के योजनाबद्ध आरेख और प्राइमर-जांच संयोजनों का अनुक्रम संशोधन)
इसके अलावा, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस द्वारा miRA-LFS का पता लगाने के लिए प्रतिक्रिया की स्थिति को अनुकूलित किया गया था। परीक्षण 2 मिनट के अंतराल पर 4-12 मिनट से 37 डिग्री पर किए जाते हैं। परिणाम 8 मिनट की प्रतिक्रिया समय में दिखाए गए हैं, और परीक्षण लाइन स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। इसके अलावा, परीक्षण 5 डिग्री अंतराल पर 22-52 डिग्री से किया जाता है। 37-42 डिग्री miRA-LFS का पता लगाने के लिए सबसे उपयुक्त तापमान है। इसलिए, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के लिए miRA-LFS विधि का इष्टतम प्रतिक्रिया समय और तापमान क्रमशः 8 मिनट और 37 डिग्री था। इस तथ्य के साथ कि अंतिम परिणाम 1 मिनट के भीतर LFS द्वारा कल्पना की जाती है, कुल पता लगाने का समय 9 मिनट है।
(प्रतिक्रिया समय और तापमान का अनुकूलन)
प्रायोगिक परिणाम
1। संवेदनशीलता सत्यापन
स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिका संस्कृतियों (1 0^6-10^0 cfu/ml) के सीरियल dilutions से प्राप्त जीनोमिक डीएनए (GDNA) के विभिन्न सांद्रता को mira-lfs के लिए परीक्षण किया गया था।
(विभिन्न सांद्रता में सकारात्मक संकेत)
संभाव्य इकाई प्रतिगमन विश्लेषण से पता चला कि MIRA-LFS परख द्वारा निर्धारित 95% LOD 0 था। 147CFU/प्रतिक्रिया।
(पता लगाने की गणना की सीमा)
2। विशिष्टता मान्यता
MIRA-LFS का पता लगाने की चयनात्मकता को सामान्य रोगजनक सूक्ष्मजीवों के 18 उपभेदों और नैदानिक स्टेफिलोकोकस हेमोलिटिकस के 15 उपभेदों का विश्लेषण करके निर्धारित किया गया था। परिणामों से पता चला कि MIRA-LFS परीक्षण सभी 18 अन्य रोगजनक बैक्टीरिया के लिए नकारात्मक था, और स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के 15 सत्यापित नैदानिक नमूनों के लिए सकारात्मक।
(मानक रोगजनक बैक्टीरिया के 8 उपभेदों और नैदानिक हेमोलिटिक स्ट्रेप्टोकोकस के 15 उपभेदों का परीक्षण किया गया था, क्रमशः)
MIRA-LFS परख में उच्च चयनात्मकता है और यह स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस की स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है।
3। वास्तविक नमूना परीक्षण
कुल 95 नमूनों को यादृच्छिक रूप से लियानुंगंग सेकंड पीपुल्स अस्पताल से एकत्र किया गया था, जिसमें त्वचा के 35 नमूने और नरम ऊतक, मूत्र के 16 नमूने, थूक के 14 नमूने और रक्त के 30 नमूने शामिल थे।
(95 नैदानिक नमूनों का परीक्षण विभिन्न तरीकों से किया गया था)
परिणामों से पता चला कि पता लगाने की विधि QPCR विधि के साथ 100% सुसंगत थी। इसके अलावा, सोने के मानक (GB/T4789। 11-2003) के साथ तुलना में, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिका संक्रमण की पहचान के लिए miRA-LFS परख की संवेदनशीलता और विशिष्टता क्रमशः 100% और 98.73% थी। ये परिणाम नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का पता लगाने में विधि की तकनीकी व्यवहार्यता को और अधिक मान्य करते हैं।
MIRA-LFS विधि का उपयोग POCT द्वारा स्टैफिलोकोकस हेमोलाइटिकस के तेजी से पता लगाने के लिए किया जाता है, जो कुशल, सटीक, सरल और लागत प्रभावी है, जो तेजी से निदान और उपचार निर्णयों के लिए सहायक है।