स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस एक ग्राम-पॉजिटिव कोगुलेज़-नेगेटिव जीवाणु है जो अस्पतालों में बहुत आम है। हाल के वर्षों में, अस्पताल-अधिग्रहित संक्रमणों को उनके उच्च जोखिम के कारण बढ़ते हुए ध्यान मिला है। स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस आगे त्वचा के संक्रमण, मेनिन्जाइटिस, पेरिटोनिटिस और यहां तक कि सेप्सिस का कारण बन सकता है। नैदानिक निदान में देरी से स्वास्थ्य की स्थिति खराब हो सकती है, इसलिए एस। हेमोलिटिकस का तेजी से निदान सटीक उपचार के लिए महत्वपूर्ण है।
चीन के दूसरे पीपुल्स हॉस्पिटल के सेंट्रल लेबोरेटरी डिपार्टमेंट के टीचर जी टूओ की शोध टीम, चीन ने 6.2 के एक प्रभाव कारक के साथ "एनालिटिका चिमिका एक्टा" जर्नल में मीर-एलएफएस के साथ नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का एक रैपिड एंड विजुअल डिटेक्शन "एक रैपिड एंड विजुअल डिटेक्शन प्रकाशित किया।
1.Research अवलोकन
इस अध्ययन में, MVAA जीन पर आधारित एक MIRA-LFS विधि स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का पता लगाने के लिए स्थापित की गई थी। मल्टी-एंजाइम इज़ोटेर्मल रैपिड न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकी miRA को तेजी से रोगज़नक़ का पता लगाने के लिए पार्श्व प्रवाह परीक्षण स्ट्रिप LFS के साथ जोड़ा गया था।
प्रयोग 37 डिग्री पर आयोजित किया गया था, और परिणाम 9 मिनट के भीतर पता लगाया जा सकता है। पता लगाने की संवेदनशीलता 0 थी। 147CFU/प्रतिक्रिया।
MIRA-LFS का पता लगाने की विधि नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के फिक्स्ड-पॉइंट डिटेक्शन के लिए उपयुक्त है, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस की पहचान करने के लिए POCT विधि को महसूस करते हुए, जो कि अंडरस्टैंडेड मेडिकल सेवाओं वाले क्षेत्रों में तेजी से रोग निदान और उपचार के लिए बहुत मूल्य है।
अनुसंधान टीम ने 95 यादृच्छिक नैदानिक नमूनों का विश्लेषण करने के लिए miRA-LFS, QPCR और पारंपरिक बैक्टीरियल संस्कृति विधियों का उपयोग किया और नैदानिक प्रयोज्यता की पुष्टि की।
2.Research तरीके
MIRA-LFS का पता लगाने का योजनाबद्ध आरेख ऊपर दिखाया गया है।
अनुसंधान ने एएमपी-भविष्य के बायोटेक के डीएनए इज़ोटेर्मल रैपिड एम्प्लीफिकेशन किट (कोलाइडल गोल्ड टेस्ट स्ट्रिप टाइप) और न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन टेस्ट स्ट्रिप्स का उपयोग किया।
MVAA जीन प्राइमर की लंबाई 30-35 न्यूक्लियोटाइड है, और प्रवर्धन उत्पाद की लंबाई 100-350 bp है। कुल 6 जोड़े उम्मीदवार प्राइमरों को डिजाइन किया गया था। MIRA विश्लेषण मानक स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस उपभेदों के GDNA का उपयोग करके किया गया था, उम्मीदवार प्राइमरों की जांच की गई थी, और प्रवर्धन उत्पादों को 2% agarose जेल वैद्युतकणसंचलन का उपयोग करके प्रदर्शित किया गया था।
फिर फॉरवर्ड प्राइमर अनुक्रम (16 बीपी पिछड़े विस्तार) के आधार पर जांच को डिजाइन करें। जांच के 5 'छोर को FITC के साथ लेबल किया गया था और 3' छोर को C3 अवरुद्ध के साथ लेबल किया गया था। जांच में 31 न्यूक्लियोटाइड को बदलने के लिए THF का उपयोग करें। THF 5 'छोर से 30 बीपी और 3' छोर से 15 बीपी है। चयनित रिवर्स प्राइमर के 5 'छोर को बायोटिन के साथ लेबल किया गया है।
इसके अलावा, अनुसंधान टीम ने स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के miRA-LFS का पता लगाने के लिए प्रतिक्रिया की स्थिति को अनुकूलित किया। 4 से 12 मिनट तक 2 मिनट के अंतराल पर 37 डिग्री पर परीक्षण करें। परिणाम 8min प्रतिक्रिया समय पर प्रदर्शित होते हैं और परीक्षण लाइन स्पष्ट रूप से दिखाई देती है। इसके अलावा, परीक्षण 22-52 डिग्री से 5 डिग्री के अंतराल पर आयोजित किए जाते हैं। 37-42 डिग्री miRA-LFS का पता लगाने के लिए सबसे उपयुक्त तापमान है। इसलिए, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के लिए miRA-LFS विधि का इष्टतम प्रतिक्रिया समय और तापमान क्रमशः 8 मिनट और 37 डिग्री है। 1 मिनट के भीतर LFS द्वारा अंतिम परिणाम की कल्पना के साथ, कुल पता लगाने का समय 9 मिनट है।
3. एक्सपेरिमेंटल परिणाम
संवेदनशीलता सत्यापन
MiRA-LFS परख को क्रमिक रूप से पतला स्टैफिलोकोकस हेमोलाइटिकस संस्कृतियों (1 0^6-10^0 cfu/ml) से प्राप्त जीनोमिक डीएनए (GDNA) के विभिन्न सांद्रता पर किया गया था।
संभाव्य इकाई प्रतिगमन विश्लेषण से पता चला कि MIRA-LFS परख द्वारा निर्धारित 95% LOD 0 था। 147 CFU/प्रतिक्रिया।
विशिष्टता सत्यापन
18 सामान्य रोगजनक माइक्रोबियल उपभेदों और 15 नैदानिक स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस उपभेदों का विश्लेषण करके, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के miRA-LFS का पता लगाने की चयनात्मकता निर्धारित की गई थी। परिणामों से पता चला कि MIRA-LFS परीक्षण 18 अन्य रोगजनक बैक्टीरिया के लिए नकारात्मक था और स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के 15 सत्यापित नैदानिक नमूनों के लिए सकारात्मक था।
MIRA-LFS का पता लगाना अत्यधिक चयनात्मक है और स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस की स्क्रीनिंग के लिए उपयुक्त है।
वास्तविक नमूना परीक्षण
Lianyungang सेकंड पीपुल्स हॉस्पिटल ने बेतरतीब ढंग से 95 नमूने एकत्र किए, जिनमें 35 त्वचा और नरम ऊतक के नमूने, 16 मूत्र के नमूने, 14 थूक के नमूने और 30 रक्त के नमूने शामिल हैं।
परिणामों से पता चला कि पता लगाने की विधि QPCR विधि के साथ 100% सुसंगत थी। इसके अलावा, सोने के मानक (GB/T4789। 11-2003) के साथ तुलना में, स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस संक्रमण की पहचान करने के लिए miRA-LFS का पता लगाने की विधि क्रमशः 100% और 98.73% थी। इन परिणामों ने नैदानिक नमूनों में स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस का पता लगाने में इस पद्धति की तकनीकी व्यवहार्यता को और सत्यापित किया।
MIRA-LFS विधि का उपयोग स्टैफिलोकोकस हेमोलिटिकस के तेजी से POCT का पता लगाने के लिए किया जाता है। यह कुशल, सटीक, सरल और कम लागत वाला है, और तेजी से निदान और उपचार निर्णय लेने में मदद करता है।
मीरा तकनीक के बारे में जानें
एएमपी-फ्यूचर की मल्टी-एंजाइम इज़ोटेर्मल रैपिड न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकी 39 डिग्री -42 डिग्री के निरंतर तापमान पर न्यूक्लिक एसिड को बढ़ाती है, केवल 5-20 मिनट की प्रतिक्रिया समय के साथ। इसके अलावा, सख्त प्रयोगशाला स्थितियों की आवश्यकता नहीं है, और आवेदन परिदृश्य विविध हैं: सामान्य अस्पताल प्रयोगशाला विभाग, प्राथमिक देखभाल, गृह परीक्षण, क्षेत्र, आदि।
अभिकर्मक उत्पाद प्रपत्र विविध हैं: फ्रीज-सूखे पाउडर, फ्रीज-सूखे माइक्रोसेफर्स, आदि; प्रदर्शन परिणाम विविध हैं: जेल वैद्युतकणसंचलन, प्रतिदीप्ति वक्र, कोलाइडल गोल्ड टेस्ट स्ट्रिप्स, आदि अभिकर्मक में स्थिर प्रदर्शन होता है, संचालित करना आसान है, और भंडारण और परिवहन के लिए सुविधाजनक है।
कोर प्लेटफ़ॉर्म तकनीक के रूप में MIRA के साथ, इसने "अल्ट्रा-फास्ट न्यूक्लिक एसिड रिलीज टेक्नोलॉजी", "ड्यूल-चैनल इज़ोटेर्मल प्रतिदीप्ति डिटेक्टर", "इंटीग्रेटेड पूरी तरह से स्वचालित बंद डिटेक्शन सिस्टम", "सेल्फ-टेस्टिंग न्यूक्लिक एसिड डिटेक्शन डिवाइस" जैसे सहायक उत्पादों की एक श्रृंखला विकसित की है।