आणविक निदान के क्षेत्र में, पोलीमरेज़ चेन रिएक्शन (पीसीआर) को लंबे समय से न्यूक्लिक एसिड का पता लगाने के लिए स्वर्ण मानक माना जाता है। हाल के वर्षों में, रीकॉम्बिनेज़ पोलीमरेज़ एम्प्लीफिकेशन (आरपीए) द्वारा प्रस्तुत इज़ोटेर्मल एम्प्लीफिकेशन प्रौद्योगिकियों ने अपनी गति, सरलता और साइट पर परीक्षण के लिए उपयुक्तता के कारण अधिक ध्यान आकर्षित किया है।
यद्यपि पीसीआर और आरपीए दोनों न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन विधियां हैं, वे कार्य सिद्धांतों, उपकरण आवश्यकताओं और अनुप्रयोग परिदृश्यों में काफी भिन्न हैं, जिससे प्रत्येक तकनीक विभिन्न नैदानिक आवश्यकताओं के लिए उपयुक्त हो जाती है।
1. मुख्य सिद्धांत: थर्मल साइक्लिंग बनाम लगातार तापमान प्रवर्धन
पीसीआर एक जैव रासायनिक प्रक्रिया है जो एक एकल डीएनए अणु को थोड़े समय के भीतर लाखों प्रतियों में विस्तारित करने में सक्षम है। प्रतिक्रिया बार-बार थर्मल साइक्लिंग पर निर्भर करती है और इसमें तीन मुख्य चरण होते हैं:
1.विकृतीकरण (90-95 डिग्री) - डबल - फंसे हुए डीएनए को एकल स्ट्रैंड में अलग किया जाता है।
2.एनीलिंग (55-65 डिग्री) - प्राइमर लक्ष्य अनुक्रमों से जुड़ते हैं।
3.विस्तार (72 डिग्री) - डीएनए पोलीमरेज़ नए डीएनए स्ट्रैंड को संश्लेषित करता है।
इन तापमान नियंत्रित चक्रों के माध्यम से, लक्ष्य डीएनए को उच्च परिशुद्धता के साथ तेजी से बढ़ाया जाता है। हालाँकि, पीसीआर को जटिल थर्मल साइक्लिंग उपकरणों की आवश्यकता होती है और इसे पूरा होने में आमतौर पर 1-2 घंटे लगते हैं।
इसके विपरीत, आरपीए 37-42 डिग्री के निरंतर तापमान पर काम करता है, जो थर्मल साइक्लिंग के बिना तेजी से न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन को सक्षम करता है। यह तकनीक इज़ोटेर्मल परिस्थितियों में अत्यधिक विशिष्ट लक्ष्य प्रवर्धन प्राप्त करने के लिए रीकॉम्बिनेज़ प्रोटीन, एकल {{3}फंसे हुए डीएनए {{4}बाइंडिंग प्रोटीन, और स्ट्रैंड {{5}डिस्पैसलिंग डीएनए पोलीमरेज़ की समन्वित कार्रवाई पर निर्भर करती है।
आरपीए में प्रयुक्त डीएनए पोलीमरेज़ में स्ट्रैंड विस्थापन गतिविधि होती है लेकिन 5'→3' एक्सोन्यूक्लिज़ गतिविधि का अभाव होता है। प्रवर्धन के दौरान, बाहरी प्राइमर टेम्पलेट स्ट्रैंड के साथ विस्तारित होते हैं। जब वे आंतरिक प्राइमरों से संश्लेषित दोहरे - फंसे हुए क्षेत्रों का सामना करते हैं, तो पोलीमरेज़ डाउनस्ट्रीम स्ट्रैंड को नीचा नहीं कर सकता है और इसके बजाय इसे विस्थापित कर देता है, जिससे नए प्रवर्धन उत्पाद उत्पन्न होते हैं।
पूरी प्रतिक्रिया स्थिर तापमान के तहत पूरी की जाती है, जिससे जटिल उपकरणीकरण की आवश्यकता समाप्त हो जाती है और सही बिंदु{{1}की देखभाल और क्षेत्र{{2}आधारित परीक्षण सक्षम हो जाता है। रिवर्स ट्रांसक्रिपटेस को शामिल करके, आरपीए को आरएनए लक्ष्य का पता लगाने के लिए भी लागू किया जा सकता है।
प्रवर्धन परिणामों का विश्लेषण कई रीडआउट प्रारूपों का उपयोग करके किया जा सकता है, जिसमें समापन बिंदु का पता लगाना, वास्तविक समय प्रतिदीप्ति निगरानी, पार्श्व प्रवाह परख शामिल है, और उन्नत परख विकास के लिए इसे सीआरआईएसपीआर {{1} कैस सिस्टम, माइक्रोफ्लुइडिक्स, या अगली पीढ़ी अनुक्रमण (एनजीएस) के साथ एकीकृत किया जा सकता है।
अनुप्रयोग परिदृश्य: प्रयोगशाला परिशुद्धता बनाम ऑन-साइट रैपिड परीक्षण
पीसीआर सबसे मूल्यवान आणविक निदान प्रौद्योगिकियों में से एक बन गया है और न्यूक्लिक एसिड परीक्षण के लिए स्वर्ण मानक बना हुआ है।
इसकी उच्च सटीकता, लागत-प्रभावशीलता और स्केलेबिलिटी के कारण, पीसीआर का व्यापक रूप से नैदानिक निदान, केंद्रीकृत प्रयोगशालाओं, अनुसंधान संस्थानों और बड़े पैमाने पर स्क्रीनिंग कार्यक्रमों में उपयोग किया जाता है, जहां बुनियादी ढांचे और प्रशिक्षित कर्मचारी आसानी से उपलब्ध होते हैं।
दूसरी ओर, आरपीए तीव्र, ऑन-साइट डायग्नोस्टिक्स में स्पष्ट लाभ प्रदान करता है। कम से कम 20 मिनट में प्रवर्धन पूरा होने, न्यूनतम उपकरण आवश्यकताओं और सरल संचालन के साथ, आरपीए आदर्श रूप से उपयुक्त है।
- प्राथमिक स्वास्थ्य देखभाल और आपातकालीन सेटिंग्स
- सीमा शुल्क एवं सीमा निरीक्षण
- जानवरों और पौधों की बीमारियों की फील्ड स्क्रीनिंग
- पर्यावरण और खाद्य सुरक्षा परीक्षण
पोर्टेबल उपकरणों और पार्श्व प्रवाह स्ट्रिप्स के साथ संयुक्त होने पर, आरपीए पारंपरिक प्रयोगशालाओं के बाहर तेज़ और विश्वसनीय आणविक परीक्षण सक्षम बनाता है।
मीरा (मल्टीएंजाइम इज़ोथर्मल रैपिड एम्प्लीफिकेशन)एम्प फ्यूचर की स्वामित्व वाली इज़ोटेर्मल एम्प्लीफिकेशन तकनीक है। यह आरपीए के समान तकनीकी परिवार से संबंधित है और प्राकृतिक डीएनए पुनर्संयोजन और मरम्मत तंत्र से प्रेरित है, जो निरंतर तापमान के तहत तेजी से न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्राप्त करने के लिए कई कार्यात्मक एंजाइमों का उपयोग करता है।
MIRA सक्षम करने के लिए पांच प्रमुख एंजाइमों की एक समन्वित प्रणाली को नियोजित करता है, जिसमें हेलिकेज़, रीकॉम्बिनेज़, सिंगल {0}फंसे हुए डीएनए {{1} बाइंडिंग प्रोटीन और डीएनए पोलीमरेज़ शामिल हैं:
- व्यापक ऑपरेटिंग तापमान रेंज: 25 डिग्री -45 डिग्री
- तीव्र प्रवर्धन: 20 मिनट के भीतर परिणाम
- उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता
- बढ़ी हुई सुरक्षा और संदूषण का जोखिम कम हुआ
एमआईआरए एक न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन तकनीक है जिसे विशेष रूप से साइट और बिंदु पर {{2} देखभाल परीक्षण के लिए डिज़ाइन किया गया है।
MIRA प्लेटफ़ॉर्म पर निर्माण करते हुए, Amp Future ने तीव्र आणविक POCT के लिए उत्पादों का एक व्यापक पोर्टफोलियो विकसित किया है, जिसमें शामिल हैं:
रैपिड न्यूक्लिक एसिड रिलीज एजेंट:
कमरे के तापमान पर 5 मिनट के भीतर प्रवर्धक न्यूक्लिक एसिड प्राप्त होता है; कम निषेध, 50 μL तक पूर्ण नमूना लोड करने की अनुमति; कमरे के तापमान पर परिवहन और भंडारण, प्रकाश संरक्षण की आवश्यकता नहीं है।
इज़ोटेर्माल न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन अभिकर्मक:
प्रवर्धन 5-20 मिनट में पूरा हुआ, तीव्र और कुशल; विभिन्न अभिकर्मक रूप (लियोफिलिज्ड पाउडर, लियोफिलाइज्ड माइक्रोसेफर्स, आदि); विभिन्न परिणाम प्रस्तुति विधियाँ (वैद्युतकणसंचलन, प्रतिदीप्ति, परीक्षण स्ट्रिप्स)।
लघु पोर्टेबल उपकरण:
डिजिटल इज़ोटेर्मल डिटेक्टर, पॉकेट आकार के परीक्षण उपकरण, एक हाथ में आसानी से पकड़े जाने वाले, पावर बैंक से सुसज्जित, आपको प्रयोगशाला की बाधाओं से मुक्त करते हैं और सटीक न्यूक्लिक एसिड परीक्षण को क्षेत्र में लाते हैं।
एकल/एकाधिक परीक्षण स्ट्रिप्स:
बेहतर अनुकूलता के लिए MIRA पद्धति के आधार पर अनुकूलित; MIRA प्रौद्योगिकी के साथ संयुक्त, सुविधा पर प्रकाश डाला गया।
पूरी तरह से स्वचालित न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन विश्लेषक:
पूरी तरह से स्वचालित पहचान के लिए केवल एक नमूना लोडिंग ऑपरेशन की आवश्यकता होती है; पता लगाने की सीमा को एकल प्रतिलिपि तक सीमित कर दिया गया है; इज़ोटेर्मल प्रवर्धन और स्वचालित कैपिंग संदूषण के जोखिम को कम करते हैं।
ऑन-साइट रैपिड टेस्टिंग पैकेज:
मौके पर परीक्षण, कभी भी, कहीं भी, सब कुछ एक पैकेज में; 30 मिनट में परीक्षण पूरा करता है, सटीक और संवेदनशील।
अधिक उत्पाद जानकारी या समाधान के लिए, कृपया बेझिझक हमसे संपर्क करें।