मल्टीएंजाइम इज़ोटेर्मल रैपिड एम्प्लीफिकेशन और लेटरल फ्लो डिपस्टिक परख का उपयोग करके फेलिन चैफामापार्वोवायरस का दृश्यमान और तेजी से पता लगाना
पत्रिका:सेलुलर और संक्रमण माइक्रोबायोलॉजी में फ्रंटियर्स
प्रभाव कारक:4.6
बिल्ली के समान चैफामापरवोवायरस(FeChPV)एक नया पार्वोवायरस है, जो पहली बार 2019 में कनाडा में डायरिया से पीड़ित बिल्लियों में पाया गया था। इसकी रोगजनकता और आणविक विशेषताएं अस्पष्ट हैं, और यह मेजबान और आनुवंशिक विविधता प्रदर्शित करता है, जिसके लिए आगे की महामारी विज्ञान जांच की आवश्यकता होती है। वर्तमान में, FeChPV का पता लगाने के लिए कोई मानकीकृत विधि नहीं है।
मल्टीएंजाइम इज़ोटेर्मल रैपिड एम्प्लीफिकेशन {{0}पार्श्व प्रवाह डिपस्टिक (एमआईआरए -एलएफडी) विधिविभिन्न वायरस का पता लगाने के लिए इसका सफलतापूर्वक उपयोग किया गया है, जिससे तेजी, सरलता और सटीक उपकरणों की आवश्यकता न होने जैसे फायदे मिलते हैं। अनुसंधान टीम ने ज़मीनी स्तर पर नैदानिक पहचान में चुनौतियों का समाधान करने के लिए FeChPV के लिए उपयुक्त एक MIRA{1}}LFD विधि की स्थापना की। सटीक उपकरणों पर भरोसा किए बिना,MIRA{0}}LFD विधि ने 20 मिनट के भीतर 37 डिग्री पर FeChPV का पता लगाने को पूरा किया और अन्य वायरस के साथ कोई क्रॉस{3}प्रतिक्रिया नहीं दिखाई। पता लगाने की सीमा 32.3 प्रतियाँ/μL थी,पीसीआर पद्धति से 10 गुना अधिक। इसके अलावा, MIRA{2}}LFD विधि ने 417 डायरियाग्रस्त बिल्लियों के बीच 29 FeChPV{{4}सकारात्मक नमूनों का पता लगाया, जिनकी सकारात्मकता दर नेस्टेड पीसीआर विधि की तुलना में थोड़ी अधिक है। इन परिणामों से संकेत मिलता है कि FeChPV का पता लगाने के लिए स्थापित MIRA{7}}LFD विधि एक कुशल, किफायती, विश्वसनीय और सरल विधि है, जो FeChPV संक्रमण की प्रारंभिक रोकथाम और नियंत्रण में योगदान देती है।
1.प्रायोगिक तरीके
नैदानिक नमूने:इस अध्ययन में इस्तेमाल किए गए रेक्टल स्वाब के नमूने 2022 और 2024 के बीच ग्वांगडोंग, हेनान, अनहुई, झेजियांग प्रांतों और इनर मंगोलिया स्वायत्त क्षेत्र के पशु चिकित्सालयों में 632 बिल्लियों (जिनमें 417 डायरिया से पीड़ित और 115 स्वस्थ बिल्लियाँ शामिल हैं) और 474 कुत्तों (जिनमें 342 डायरिया से पीड़ित और 132 स्वस्थ कुत्ते शामिल हैं) से एकत्र किए गए थे।
न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन:निकाले गए डीएनए न्यूक्लिक एसिड को MIRA प्रणाली में जोड़ा गया। रीकॉम्बिनेज़ और प्राइमरों ने एक कॉम्प्लेक्स बनाया; सहायक प्रोटीन और सिंगल{1}स्ट्रैंड बाइंडिंग प्रोटीन की मदद से, उन्होंने डबल-स्ट्रैंडेड डीएनए टेम्पलेट पर आक्रमण किया। प्राइमर समजात पूरक क्षेत्रों से बंधे हुए हैं ताकि एक डी-लूप क्षेत्र बनाया जा सके, जबकि रीकॉम्बिनेज़ कॉम्प्लेक्स से अलग हो गया। पॉलिमरेज़ ने प्राइमरों के 3' सिरे को बांध दिया और डीएनए संश्लेषण शुरू किया, जिससे टेम्पलेट पर लक्ष्य क्षेत्र तेजी से बढ़ गया। यह प्रक्रिया तेजी से और कुशलता से चली, जिससे केवल 15 मिनट में लक्ष्य खंड का अति तीव्र प्रवर्धन प्राप्त हुआ।
परीक्षण पट्टी रंग विकास:न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन उत्पाद को 1:10 में पतला किया गया, परीक्षण पट्टी पर लगाया गया, और परिणाम 5 मिनट के बाद पढ़े गए।
न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन से लेकर परीक्षण पट्टी रंग विकास तक की पूरी प्रक्रिया में केवल 20 मिनट लगे।
प्रयोग में Amp-भविष्य के जैविक उत्पादों का उपयोग किया गया:
अध्ययन में, विशिष्ट प्राइमर जांच संयोजनों के चार डिज़ाइन किए गए सेटों की जांच की गई। परिणाम प्रस्तुति के लिए एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस और न्यूक्लिक एसिड परीक्षण स्ट्रिप्स दोनों का उपयोग किया गया था। सभी चार प्राइमर जांच संयोजन FeChPV वायरस का पता लगा सकते हैं। एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन परिणामों के अनुसार, FeChPV-4 संयोजन ने सबसे चमकीला लक्ष्य बैंड दिखाया, इसलिए इस संयोजन को बाद के परीक्षण के लिए चुना गया था।
एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन परिणामों के अनुसार, 5, 10, 15, और 20 मिनट के लिए प्रवर्धन से लक्ष्य बैंड प्राप्त हुआ। लक्ष्य बैंड की तीव्रता प्रवर्धन के 15 मिनट पर चरम पर थी, जिससे इस परख के लिए 15 मिनट इष्टतम प्रतिक्रिया समय के रूप में स्थापित हुआ। 36 डिग्री, 37 डिग्री, 38 डिग्री, 39 डिग्री और 40 डिग्री पर प्रवर्धन ने लक्ष्य बैंड का उत्पादन किया, सबसे चमकदार बैंड 39 डिग्री पर देखा गया, इस परख के लिए 39 डिग्री को इष्टतम प्रतिक्रिया तापमान के रूप में स्थापित किया गया।
(चित्र ए: 1: प्रवर्धन 5 मिनट; 2: प्रवर्धन 10 मिनट; 3: प्रवर्धन 15 मिनट; 4: प्रवर्धन 20 मिनट) (चित्र बी: 1: प्रवर्धन 36 डिग्री; 2: प्रवर्धन 37 डिग्री; 3: प्रवर्धन 38 डिग्री; 4: प्रवर्धन 39 डिग्री; 5: प्रवर्धन 40 डिग्री)
2.डिटेक्शन प्रदर्शन
संवेदनशीलता:
(चित्रा ए: एग्रोस जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करके प्रस्तुत किए गए एमआईआरए परिणाम)
(चित्रा बी: नेस्टेड पीसीआर परिणाम एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस का उपयोग करके प्रस्तुत किए गए)
(चित्रा सी: एमआईआरए परिणाम न्यूक्लिक एसिड परीक्षण स्ट्रिप्स का उपयोग करके प्रस्तुत किए गए)
नमूनों को 3.23×10⁶ प्रतियों/μL से शुरू करके 10 गुना क्रमिक तनुकरण के अधीन किया गया। एगरोज़ जेल इलेक्ट्रोफोरेसिस के साथ नेस्टेड पीसीआर 3.23×10² प्रतियों/μL का स्थिर रूप से पता लगा सकता है; एगरोज़ जेल वैद्युतकणसंचलन के साथ एमआईआरए और न्यूक्लिक एसिड परीक्षण स्ट्रिप्स के साथ एमआईआरए दोनों 3.23×10¹ प्रतियां/μL का स्थिर रूप से पता लगा सकते हैं।
एमआईआरए विधि ने दो अलग-अलग परिणाम प्रस्तुति प्रारूपों का उपयोग करके लगातार संवेदनशीलता दिखाई, और एमआईआरए विधि की संवेदनशीलता नेस्टेड पीसीआर की तुलना में बेहतर थी।
विशेषता:
(1: FeChPV, फ़ेलीन चैपामापरवोवायरस; 2: FPV, फ़ेलीन पैनेलुकोपेनिया वायरस; 3: FeAstV, फ़ेलीन एस्ट्रोवायरस; 4: FBoV, फ़ेलीन बोकावायरस; 5: CachaV, कैनाइन चैपार्वोवायरस; 6: नकारात्मक नियंत्रण)
नव स्थापित एमआईआरए - एलएफडी विधि ने केवल FeChPV का पता लगाया और अन्य संदर्भ वायरस के साथ कोई क्रॉस {{1} प्रतिक्रियाशीलता नहीं दिखाई, जो अच्छी विशिष्टता का संकेत देती है।
3.अध्ययन सारांश
इस अध्ययन ने उच्च परिशुद्धता वाले उपकरणों की आवश्यकता के बिना FeChPV का पता लगाने के लिए एक MIRA{0}}LFD विधि स्थापित की। उच्च संवेदनशीलता और विशिष्टता के साथ एक कुशल, किफायती और विश्वसनीय पहचान विधि के रूप में, एमआईआरए -एलएफडी विधि नैदानिक पहचान के लिए अधिक उपयुक्त है, जो FeChPV संक्रमण की प्रारंभिक रोकथाम और नियंत्रण के लिए तकनीकी सहायता प्रदान करती है।
4.एएमपी-भविष्य बायोटेक
एमआईआरए मल्टीएंजाइम इज़ोथर्मल रैपिड न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन एक ऐसी तकनीक है जो वास्तव में साइट पर तेजी से पता लगाने में सक्षम बनाती है।
एमआईआरए तकनीक इन विवो जीन पुनर्संयोजन मरम्मत तंत्र पर आधारित है, जो कमरे के तापमान पर तेजी से (5{5}}20 मिनट), संवेदनशील, विशिष्ट और सुरक्षित न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन (25 डिग्री -45 डिग्री) प्राप्त करने के लिए कमरे के तापमान पर कई कार्यात्मक प्रोटीन की सहक्रियात्मक क्रिया पर निर्भर करती है। MIRA प्रौद्योगिकी की इज़ोटेर्मल प्रकृति के कारण, इसमें उपकरण की कम आवश्यकताएं और सरल संचालन है। लघु पोर्टेबल उपकरणों के माध्यम से, इसे विभिन्न अनुप्रयोग परिदृश्यों में फ्रंटलाइन परीक्षण में लागू किया जा सकता है, जिससे पीओसीटी, घरेलू परीक्षण, कृषि क्षेत्रों और साइट कानून प्रवर्तन जैसी सेटिंग्स में तेजी से और सटीक न्यूक्लिक एसिड परीक्षण लाया जा सकता है। एमआईआरए तकनीक के आधार पर, एएमपी{8}फ्यूचर बायोटेक ने साइट पर रैपिड परीक्षण उत्पादों की एक श्रृंखला विकसित की है, जिसमें रैपिड न्यूक्लिक एसिड रिलीज एजेंट, इज़ोटेर्मल रैपिड न्यूक्लिक एसिड एम्प्लीफिकेशन अभिकर्मक, कोलाइडल गोल्ड टेस्ट स्ट्रिप्स और छोटे पोर्टेबल उपकरण शामिल हैं, जो साइट पर रैपिड आणविक परीक्षण के लिए एक समग्र समाधान तैयार करते हैं। इसके अलावा, एम्प-फ्यूचर की एमआईआरए तकनीक सीआरआईएसपीआर तकनीक, एनजीएस, एसएनपी, माइक्रोफ्लुइडिक्स और अन्य के साथ संयुक्त होने पर एप्लिकेशन लाभ प्रदान करती है।
ऊपर दिखाए गए ऑन-साइट रैपिड परीक्षण उत्पादों की श्रृंखला के अलावा, Amp-फ्यूचर बायोटेक यह भी प्रदान करता है:
अनुसंधान अभिकर्मक:बुनियादी वैज्ञानिक अनुसंधान के साथ-साथ परियोजना साहित्य संदर्भों के लिए अभिकर्मक कच्चे माल और तकनीकी सहायता प्रदान करना।
OEM उत्पादन:पूरी प्रक्रिया के दौरान स्वतंत्र रूप से उच्च {{0}शुद्धता, उच्च {{1} गतिविधि वाले तैयार उत्पादों का उत्पादन करने में सक्षम, औद्योगिक स्तर पर बड़े पैमाने पर उत्पादन प्राप्त करने में सक्षम।
परियोजना कमीशन विकास:अनुक्रम जानकारी और अनुक्रम संरेखण विश्लेषण परिणाम, प्रोजेक्ट प्राइमर-जांच डिजाइन और संश्लेषण, प्रोजेक्ट प्लास्मिड संश्लेषण और नमूने, प्रोजेक्ट रिपोर्ट और परिणाम, आदि।
अधिक जानकारी के लिए, पूछताछ करने के लिए आपका स्वागत है।