तीव्र श्वसन संक्रमण बच्चों में सामान्य श्वसन संबंधी बीमारियां हैं, अक्सर वायरस के कारण होते हैं। रेस्पिरेटरी सिंकिटियल वायरस (आरएसवी) और रेस्पिरेटरी एडेनोवायरस (एडीवी) दो सामान्य रोगजनकों हैं जो बच्चों में तीव्र श्वसन संक्रमण पैदा करते हैं। हल्के मामलों से खांसी और बहती नाक जैसे सामान्य ठंड लक्षण हो सकते हैं, जबकि गंभीर मामलों में निमोनिया और ओटिटिस मीडिया जैसी गंभीर जटिलताएं हो सकती हैं। विश्व स्वास्थ्य संगठन की सिफारिशों के अनुसार, रोगजनकों का पता लगाना तेज, सटीक, संवेदनशील और विशिष्ट होना चाहिए और विशेष तकनीशियनों या बड़े उपकरणों पर भरोसा नहीं करना चाहिए। इसलिए, RSV और ADV के लिए एक पता लगाने की विधि विकसित करना विशेष रूप से महत्वपूर्ण है जो उपरोक्त पता लगाने की आवश्यकताओं को पूरा कर सकता है।
शेन्ज़ेन चिल्ड्रन हॉस्पिटल के पीडियाट्रिक्स इंस्टीट्यूट के निदेशक मा डोंगली के अनुसंधान समूह ने एक लेख प्रकाशित किया "एक मल्टीप्लेक्स रीकॉम्बिनेज पोलीमरेज़ प्रवर्धन परख को CRISPR/ CAS12A के साथ संयुक्त रूप से सांस की सिंकिटियल वायरस और श्वसन एडेनोवायरस" जर्नल में "वैज्ञानिक रिपोर्ट" में एक प्रभाव कारक के साथ।
अनुसंधान अवलोकन
मल्टी-एंजाइम इज़ोटेर्मल रैपिड न्यूक्लिक एसिड प्रवर्धन प्रौद्योगिकी miRA को CRISPR/CAS डिटेक्शन सिस्टम के साथ जोड़ा जाता है। MIRA प्राइमरों और CRISPR RNAs (CRRNAs) को डिजाइन करके, कई अनुक्रम तुलनाओं का प्रदर्शन, प्रतिक्रिया की स्थिति का अनुकूलन करना, और संवेदनशीलता और विशिष्टता को सत्यापित करने के लिए प्रतिदीप्ति संख्यात्मक पहचान उपकरणों का उपयोग करना।
और तुलनात्मक नियंत्रण के रूप में QPCR परिणामों का उपयोग करते हुए, 160 नैदानिक गले स्वैब नमूनों के परीक्षण परिणामों की स्थिरता का अध्ययन किया गया था।
प्रायोगिक परिणाम
1। MIRA-CRISPR/CAS12A डिटेक्शन विधि की संवेदनशीलता और विशिष्टता
MIRA विधि का पता लगाने में, RSV-F1/R1 प्राइमर जोड़ी का उपयोग RSV, ADV, PIV, RHV, MP, CP, FLUB, HMPV, FLUA, या RSV/ADV सह-संक्रमित रोगियों के गले के स्वैब नमूनों से न्यूक्लिक एसिड को बढ़ाने के लिए किया जाता है। RSV और ADV को छोड़कर, जिसमें बैंड को बढ़ाया गया था, अन्य परिणाम नकारात्मक थे, यह दर्शाता है कि चयनित miRA प्राइमरों ने अन्य आठ रोगजनकों के साथ परीक्षण नहीं किया था और अच्छी तरह से संरक्षित थे।
इसके बाद, RSV और ADV पुनः संयोजक प्लास्मिड्स को बाँझ पानी का उपयोग करके 10 बार पतला किया गया, और RSV और ADV के लिए पता लगाने की सीमा दोनों 10 थे6प्रतियां/एमएल।
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2। QPCR के साथ तुलना करें
QPCR विधि के साथ तुलना में, RSV और ADV की पहचान सीमा दोनों 103 प्रतियां/एमएल हैं
(RSV और ADV के QPCR का पता लगाने की संवेदनशीलता)
MIRA-CRISPR विधि जमीनी स्तर की प्रयोगशालाओं के लिए अधिक उपयुक्त है, जिसमें कम पता लगाने के समय, सरल संचालन और प्रयोगात्मक संचालन को पूरा करने के लिए बड़े पैमाने पर QPCR उपकरणों की कोई आवश्यकता नहीं है।
3। नैदानिक नमूनों की तुलना
तीव्र श्वसन संक्रमण वाले 160 बच्चों से गले के स्वैब के नमूने एकत्र किए गए थे। उसी समय, MIRA-CRISPR विधि और QPCR विधि का उपयोग पता लगाने के लिए किया गया था, और परिणामों की तुलना नैदानिक परीक्षण परिणामों के साथ की गई थी।
QPCR विधि की तुलना में, RSV और ADV के लिए MIRA-CRISPR विधि की संवेदनशीलता क्रमशः 98.1% और 91.4% थी, और पता लगाने की विशिष्टता 1 0 0% थी। KAPPA मान 0.95 से अधिक है, जो उच्च स्तर की स्थिरता का संकेत देता है।
MIRA-CRISPR विधि में RSV और ADV के तेजी से, संवेदनशील और विशिष्ट पता लगाने के फायदे हैं। यह वायरल संक्रमणों का तुरंत और सटीक पता लगा सकता है, और दुर्लभ चिकित्सा संसाधनों वाले क्षेत्रों में उपयोग के लिए अधिक उपयुक्त है।